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雙縮脲法蛋白質含量測定試劑盒-說明書

更新時間:2025-01-15      瀏覽次數:940

 雙縮脲法蛋白質含量測定試劑盒說明書

分光光度法 50T/48S

注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定,確保蛋白濃度在 110mg/ml 范圍內。

測定意義:

樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外,可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。

測定原理:

強堿性溶液中,雙縮脲與CuSO4 形成紫色絡合物;紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比,而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關,故可用來測定蛋白質含量。該方法測定范圍為 1~10mg 蛋白質,適用于蛋白質濃度高的樣品,尤其是動物材料

自備儀器和用品:

可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1 ml 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

組成:

 

產品名稱

DE6001-50T/48S

Storage

試劑一:液體

50ml

4℃

標準品:液體

1ml

4℃

說明書

一份

 

標準品:液體 1ml×1 瓶,5 mg/ml4℃保存。

樣品中可溶性蛋白質提取:

1.        液體樣品:澄清無色液體樣品可以直接測定。

2.        組織樣品:按照組織質量(g):提取液體積(ml)15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml 提取液(自備,根據需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水)冰浴勻漿,8000g4℃離心 10min,取上清,即待測液。(動物樣品常常需要稀釋)

3.        細菌、真菌:按照細胞數量(104 個):提取液體積(ml500~10001 的比例(建議 500 萬細胞加入1ml 提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min);然后 8000g4℃離心 10min,取上清置于冰上待測。

測定步驟:

1.     分光光度計預熱 30 min,調節(jié)波長到 540 nm,蒸餾水調零。

2.     空白管:取 1 mL 玻璃比色皿,加入 200μl 蒸餾水,1000μl 試劑一,混勻后室溫靜置 15 min,于 540nm 比色,記為 A 空白管。

3.     標準管:取 1 mL 玻璃比色皿,加入 200μl 標準液,1000μl 試劑一,混勻后室溫靜置 15 min,于 540 nm 比色,記為 A 標準管。

4.     測定管:取 1 mL 玻璃比色皿,加入 200μl 待測液,1000μl 試劑一,混勻后室溫靜置 15 min,于 540nm 比色,記為 A 測定管。

注意:空白管和標準管只需測定一次。

樣品中蛋白質濃度計算公式

C 待測(mg/mL= C 標準管×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)

=5×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)

 

注意事項:

1.  樣品蛋白濃度須在 1~10mg/ml 范圍內,低于 1mg/ml 不能用此法,高于 10mg/ml 須做相應稀釋。因此測定前用 1~2 個樣做預實驗,確保蛋白濃度在 1~10mg/ml 范圍內。

2.  待測樣品蛋白提取可用生理鹽水、雙蒸水或不含蛋白的 PBS 提取。該法受硫酸銨、Tris 緩沖液干擾,提取液中應不含這些物質;否則改用BCA 蛋白質含量測定試劑盒。


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