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賴氨酸(lysine,Lys)含量測定試劑盒-說明書

更新時間:2025-01-10      瀏覽次數:659

賴氨酸(lysineLys)含量測定試劑盒說明書

微量法 100 /96

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義:

賴氨酸是人體必需氨基酸之一,能促進人體發育、增強免疫功能,并有提高中樞神經組織功能的作用。賴氨酸為堿性必需氨基酸。由于谷物食品中的賴氨酸含量甚低,且在加工過程中易被破壞而缺乏,故稱為第一限制性氨基酸

測定原理:

蛋白質中的賴氨酸具有一個游離的ε-NH2,它與茚三酮試劑反應生成藍紫色物質,其顏色的深淺在一定范圍內與賴氨酸的含量成線性關系。亮氨酸與賴氨酸的碳原子數目相同,而且僅有個游離氨基(ε-NH2)所以通常用亮氨酸配制標準液。

組成:

產品名稱

BH6010-100T/96S

Storage

提取液:液體

100ml

4℃

試劑一:粉劑

1  

4℃

試劑二:液體

12.5ml

4℃

試劑三:液體

15ml

4℃

試劑四:60%乙醇(自備

1  

4℃

說明書

1

自備儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、蒸餾水、水浴鍋。

賴氨酸提取:

樣本烘干粉碎,稱取約 0.01g 樣本,加入 1ml 提取液,充分勻漿。80℃水浴提取 20min,冷卻后 10000g

離心 10min,取上清待測。

測定步驟:

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,調節波長至 570nm,蒸餾水調零。

2、工作液的配制:取 10ml 試劑一與 10ml 試劑二混合搖勻,取上清備用。用不完的試劑 4℃保存。

3、在有蓋EP 管中加入下列試劑:

試劑名稱(μl

測定管

空白管

樣本

100


提取液


100

工作液

200

200

混勻,80℃水浴 30min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻至常溫。

試劑四

300

300

混勻,取 200μl 至微量石英比色皿或 96 孔板中,于 530nm 波長處記錄吸光值AA=A 測定管-A 白管。空白管只要做一管。

賴氨酸含量計算:

a.  用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定回歸方程為 y = 0.0062x - 0.0212x 為賴氨酸含量(µg/ml),y 為吸光值。

1.  按照蛋白濃度計算

賴氨酸含量(µg/mg prot)=[(A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515

=185.73×(A+0.0212) ÷Cpr

2.  按照樣本質量計算

賴氨酸含量(µg/g 干重)=[(A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515

=185.73×(A+0.0212) ÷W

V1:加入反應體系中樣本體積,0.1mlV2:加入提取液體積,1 mlCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mlW:樣本質量,g1.1515,校正系數。

b.  96 孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定回歸方程為 y = 0.0031x - 0.0212x 為賴氨酸含量(µg/ml),y 為吸光值。

1.  按照蛋白濃度計算

賴氨酸含量(µg/mg prot)=[(A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515

=371.45×(A+0.0212) ÷Cpr

2.  按照樣本質量計算

賴氨酸含量(µg/g 干重)= [(A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515

=371.45×(A+0.0212) ÷W

V1:加入反應體系中樣本體積,0.1mlV2:加入提取液體積,1 mlCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mlW:樣本質量,g1.1515,校正系數。


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